由表4知：洗脱流速越大，柱压越高，峰型越窄。

据悉，3月19日，韩国食品药品安全部（MFDS）发布了中国产腌制食品（盐腌藕）进口的检查指示。检查项目：二氧化硫

异紫堇丁碱占酸化氯仿相的48.9%，紫堇丁碱占酸化氯仿相的19.7%，两者合计共占酸化氯仿相的68.6%。上样量1 m L，进样体积10L，每个样品运行检测时间为50min，柱温30℃，检测波长260 nm。建立积分面积与浓度之间关系的回归方程，紫堇丁碱y=16 369 907.7x-393 024.811(R2=0.999 872 719），秃疮花中紫堇丁碱含量为0.79%。秃疮花中紫堇丁碱含量为0.79%、异紫堇丁碱含量为1.33%。为进一步研究秃疮花的药理活性和构效关系提供试验数据，为药食同源植物中单体化合物含量的定量测定奠定试验基础和理论依据。

将x带入物质的含量计算公式，可得该单体化合物在原材料中的含量（注：根据前期试验，提取率按照平均为17%进行计算）。3 讨论利用峰面积与单体化合物浓度之间线性回归方程和物质的含量计算公式，计算出单体化合物在各自原材料中的含量。当PQQ浓度在2.5~50 mg/L之间时，二者呈现良好的线性关系，由于野生菌产PQQ量多在1~20 mg/L左右，因此使用本方法进行高通量筛选的初筛具有良好的可行性。

1.4实验方法1.4.1 PQQ产生菌初筛方法的确立光谱法：对PQQ标准品进行全波长扫描，发现其在249 nm和330 nm处有两个吸收峰，将200 L PQQ标准品溶液或发酵离心上清液转移至96孔板中，用酶标仪检测 OD330与 OD249，并将空白培养基以同样的条件处理和检测，从而减去培养基吸光值的干扰。在具有合成PQQ能力的细菌中，绝大部分只能合成痕量的PQQ以供给细胞生长，只有少部分可以生产过量的PQQ，并将其排泄到培养基中，其中以甲基营养菌的合成能力最强，如甲基菌属（Methylobacill），甲基单胞菌属（Methylomonas），嗜甲基菌属（Methylophilus）和甲基杆菌属（Methylobacterium）等。由于目前PQQ化学合成步骤复杂，副产物多，而微生物发酵生产PQQ成本低，步骤少，产物分离更容易，因此微生物发酵法成为最有前景的工业化生产路线。1.4.2 HPLC法检测PQQ由于PQQ的结构上连有3个COOH，因此其易溶于水，极性较大，在普通的C18反相色谱柱上不保留。

PQQ标准品购自于Sigma公司，其他试剂均购自于国药集团。微量元素液：CaCl22H2O 30 mg/L，MnCl44H2O 5 mg/L发酵培养基：在种子培养基的基础上加入1 mL维生素液，维生素液配方（mg/L）：核黄素200，对氨基苯甲酸200，盐酸硫胺素400，烟酸400，盐酸吡哆醇400，泛酸钙400，叶酸2，生物素2，肌醇2000。

吡咯喹啉醌，英文名为pyrroloquinoline quinone（PQQ），作为许多细菌脱氢酶（甲醇脱氢酶，乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶等）的辅助因子于1964年首次被发现，它是继吡啶核苷酸和核黄素之后的第三种氧化还原酶的辅酶甘肃宕昌大黄：宕昌县。三氯甲烷(分析纯)：天津市耀华化学试剂有限公司。各地区大黄蒽醌类成分的含量有所不同，主要与其生长的海拔、光照、年限等条件引起其蒽醌含量发生改变。

按照2.2项下供试品的制备方法，制备结合蒽醌供试液和游离蒽醌供试液各6份，分别测定其吸光度，计算蒽醌的含量，结果见表1。2.3波长的选择精密量取对照品溶液0.3mL,置25mL容量瓶中，加0.5%醋酸镁甲醇溶液至刻度线，摇匀，以0.5%醋酸镁甲醇溶液作为空白对照，依照紫外-可见分光光度法，在200～700nm波长范围内扫描。1.2仪器SP-1920型双光束紫外分光光度计：上海光谱仪器有限公司。SP-756P紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司制造。

醋酸镁(分析纯)：天津市大茂化学试剂厂。1.3试剂甲醇(分析纯)：天津市大茂化学试剂厂。

2.4.4重复性试验将2.2.1和2.2.2项下供试品溶液各制备6份，以0.5%醋酸镁甲醇溶液为空白对照，在514nm波长处平行测其吸光度，计算大黄样品的游离蒽醌和结合蒽醌的平均含量分别为0.634%和7.28%，其RSD分别为2.90%和1.44%，则该方法重复性较好。甘肃岷县大黄：甘肃省定西市岷县麻子川。

青海西宁大黄：西宁市康美中药城。KQ-100DE型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。结果显示配置的大黄素对照品溶液在浓度为1.92～22.4mg/L范围内有良好的线性关系，其标准曲线见图1。结果表明蒽醌类成分在514nm处有最大吸收，所以测定波长选择在514nm处。表明样液在2h内基本稳定。说明该仪器精密度较好。

掌叶大黄和唐古特大黄被称为北大黄，主要产于青海和甘肃等地，药用大黄称为南大黄，主要产于四川和陕西等地。甘肃礼县大黄：甘肃鑫晟源生物科技有限公司，批号：19081609。

甘肃华亭大黄：华亭市马峡乡碾盘子村。大黄又名川军、将军、黄良等，是一种多年生草本植物，2015版《中国药典》规定大黄为蓼科多年生草本植物掌叶大黄(RheumpalmatumL)、唐古特大黄(RheumtanguticumMaxim.exBalf)或药用大黄(RheumofficinaleBaill)的干燥根和根茎。

FA2004B型电子分析天平：上海越平科学仪器有限公司。大黄性寒味苦，归脾、胃、大肠、肝、心包经，具有清热解毒、攻下、活血等功效。

DG160C型一斤装中药材粉碎机：浙江省瑞安市飞达药材器械厂。甘肃武威大黄：武威市古浪县大靖镇。2.4方法学考察2.4.1线性关系考察精密量取大黄素对照品溶液适量，加0.5%醋酸镁甲醇溶液制成浓度分别为1.92、6.40、9.60、12.80、16.00、19.20、22.40mg/L的大黄素对照品溶液。经现代药理学研究表明其所含结合蒽醌具有致泻作用，游离蒽醌具有抑菌抗炎等功效。

2.2.2游离蒽醌供试液的制备依据《中国药典》的方法，精密称定大黄粉末(过4号筛)约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密量取甲醇50mL，加入到具塞锥形瓶，称定其总重量，水浴加热回流1h，放冷至室温，再称定其重量，再用甲醇补足冷凝回流时被挥发掉的甲醇，摇匀后用普通滤纸过滤，取续滤液2mL，置10mL容量瓶中，挥干三氯甲烷，加0.5%醋酸镁甲醇溶液至刻度线，摇匀，在紫外下测定其吸光度A，根据标准曲线中的线性方程计算其含量。该测定方法相对来说比较成熟稳定，且简单易行，成本低。

2方法2.1对照品溶液的配制用大黄素作为对照品，0.5%醋酸镁甲醇溶液作为显色剂，精密称定大黄素对照品20.00mg，置25mL容量瓶中，加0.5%醋酸镁甲醇溶液至刻度线，然后摇匀，即得0.8g/L的大黄素对照品溶液[4]。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：蒽醌，醋酸镁，大黄素。

4讨论本文应用紫外-可见分光光度法对不同地区的大黄中游离蒽醌和结合蒽醌进行含量测定。DF-101S型集热式恒温加热磁力搅拌器：巩义市予华仪器有限公司。

2.2供试品的制备2.2.1结合蒽醌供试液的制备依据《中国药典》的方法，精密称定大黄粉末(过四号筛)约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密量取甲醇50mL，加入到具塞锥形瓶，称定其总重量，水浴加热回流1h，放冷至室温后，称定其重量，再用甲醇补足冷凝回流时被挥发掉的甲醇，摇匀后用普通滤纸过滤。从结果可以看出，游离蒽醌产地最高的是甘肃宕昌大黄，其达到0.668%。1实验材料1.1药物大黄素对照品：上海如吉生物科技，批号：180810。除此之外，还可用于消化系统和循环系统，可以调节机体的胃肠道功能，保护心血管作用，抗肿瘤和调节免疫功能。

通过对测定结果分析总结，发现甘肃宕昌县和甘肃礼县的大黄蒽醌类成分的含量比较高，其中游离蒽醌类成分的含量高达0.668%，结合蒽醌类成分含量高达7.38%，与文献研究结果相符。结果为游离蒽醌的RSD为1.81%，结合蒽醌的RSD为1.86%。

精密量取续滤液5mL，置烧瓶中然后挥干甲醇，加8%HCL溶液10mL，超声处理3min，再加三氯甲烷10mL，冷凝回流1h，放冷至室温，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，振荡摇匀，静置5min，分离出三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取4次，每次6mL，合并三氯甲烷液，转移至50mL容量瓶中，并定容至刻度线，摇匀，精密量取2mL溶液，置10mL容量瓶中，挥干三氯甲烷，加0.5%醋酸镁甲醇溶液至刻度线，摇匀，在紫外下测定其吸光度，根据标准曲线中的线性方程计算其含量。以0.5%醋酸镁甲醇溶液为空白对照，测定各溶液在514nm波长处的吸光度，并以浓度C(mg/L)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。

RE-S2型旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂。2.4.2精密度试验取对照品溶液(12.68mg/L)，在514nm波长处，测定其吸光度，RSD=0.25%(n=6)。